Σας ευχαριστούμε που επισκεφθήκατε το Nature.com. Η έκδοση του προγράμματος περιήγησης που χρησιμοποιείτε έχει περιορισμένη υποστήριξη CSS. Για καλύτερα αποτελέσματα, συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε μια νεότερη έκδοση του προγράμματος περιήγησής σας (ή να απενεργοποιήσετε τη Λειτουργία συμβατότητας στον Internet Explorer). Εν τω μεταξύ, για να διασφαλίσουμε τη συνεχή υποστήριξη, εμφανίζουμε τον ιστότοπο χωρίς στυλ ή JavaScript.
Η μικροβιακή ανάπτυξη σε τραύματα συχνά εκδηλώνεται ως βιοφίλμ, τα οποία παρεμβαίνουν στην επούλωση και είναι δύσκολο να εξαλειφθούν. Οι νέοι επίδεσμοι αργύρου ισχυρίζονται ότι καταπολεμούν τις μολύνσεις των τραυμάτων, αλλά η αποτελεσματικότητα του αντιβιοφίλμ και οι ανεξάρτητες από τη μόλυνση θεραπευτικές τους επιδράσεις είναι γενικά άγνωστες. Χρησιμοποιώντας μοντέλα βιοφίλμ in vitro και in vivo του Staphylococcus aureus και Pseudomonas aeruginosa, αναφέρουμε την αποτελεσματικότητα των επιδέσμων που παράγουν ιόντα Ag1+. Επιδέσμους Ag1+ που περιέχουν αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ και χλωριούχο βενζεθόνιο (Ag1+/EDTA/BC), και επιδέσμους που περιέχουν νιτρικό άργυρο (οξυάλατα Ag), οι οποίοι παράγουν ιόντα Ag1+, Ag2+ και Ag3+ για την καταπολέμηση του βιοφίλμ του τραύματος και την επίδρασή του στην επούλωση. Οι επίδεσμοι Ag1+ είχαν ελάχιστες επιδράσεις στο βιοφίλμ του τραύματος in vitro και σε ποντίκια (C57BL/6j). Αντίθετα, τα οξυγονωμένα άλατα Ag και οι επίδεσμοι Ag1+/EDTA/BC μείωσαν σημαντικά τον αριθμό των βιώσιμων βακτηρίων στα βιοφίλμ in vitro και κατέδειξαν σημαντική μείωση των βακτηριακών και EPS συστατικών σε βιοφίλμ τραυμάτων ποντικού. Αυτοί οι επίδεσμοι είχαν διαφορετικές επιδράσεις στην επούλωση τραυμάτων μολυσμένων με βιοφίλμ και τραυμάτων που δεν είχαν μολυνθεί από βιοφίλμ, με τους οξυγονωμένους επιδέσμους άλατος να έχουν πιο ευεργετικές επιδράσεις στην επανεπιθηλιοποίηση, το μέγεθος του τραύματος και τη φλεγμονή σε σύγκριση με τις θεραπείες ελέγχου και άλλους επιδέσμους με άργυρο. Οι διαφορετικές φυσικοχημικές ιδιότητες των επιδέσμων με άργυρο μπορεί να έχουν διαφορετικές επιδράσεις στο βιοφίλμ και την επούλωση του τραύματος, και αυτό θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη κατά την επιλογή ενός επιδέσμου για τη θεραπεία τραυμάτων μολυσμένων με βιοφίλμ.
Τα χρόνια τραύματα ορίζονται ως «τραύματα που δεν καταφέρνουν να προχωρήσουν στα κανονικά στάδια της επούλωσης με ομαλό και έγκαιρο τρόπο»1. Τα χρόνια τραύματα δημιουργούν ένα ψυχολογικό, κοινωνικό και οικονομικό βάρος για τους ασθενείς και το σύστημα υγειονομικής περίθαλψης. Οι ετήσιες δαπάνες του NHS για τη θεραπεία τραυμάτων και συναφών συννοσηροτήτων εκτιμώνται σε 8,3 δισεκατομμύρια λίρες την περίοδο 2017–182. Τα χρόνια τραύματα αποτελούν επίσης ένα πιεστικό πρόβλημα στις Ηνωμένες Πολιτείες, με το Medicare να εκτιμά το ετήσιο κόστος θεραπείας ασθενών με τραύματα σε 28,1–96,8 δισεκατομμύρια δολάρια3.
Η μόλυνση είναι ένας σημαντικός παράγοντας που εμποδίζει την επούλωση τραυμάτων. Οι μολύνσεις συχνά εκδηλώνονται ως βιοφίλμ, τα οποία υπάρχουν στο 78% των μη επουλούμενων χρόνιων τραυμάτων. Τα βιοφίλμ σχηματίζονται όταν οι μικροοργανισμοί προσκολλώνται μη αναστρέψιμα σε επιφάνειες, όπως οι επιφάνειες τραυμάτων, και μπορούν να συσσωματωθούν σχηματίζοντας εξωκυτταρικές κοινότητες που παράγουν πολυμερή (EPS). Το βιοφίλμ τραύματος σχετίζεται με αυξημένη φλεγμονώδη απόκριση που οδηγεί σε βλάβη των ιστών, η οποία μπορεί να καθυστερήσει ή να αποτρέψει την επούλωση4. Η αύξηση της βλάβης των ιστών μπορεί να οφείλεται εν μέρει στην αυξημένη δραστηριότητα των μεταλλοπρωτεϊνασών της μήτρας, της κολλαγενάσης, της ελαστάσης και των δραστικών ειδών οξυγόνου5. Επιπλέον, τα φλεγμονώδη κύτταρα και τα βιοφίλμ είναι τα ίδια υψηλά επίπεδα κατανάλωσης οξυγόνου και μπορούν επομένως να προκαλέσουν τοπική υποξία ιστών, εξαντλώντας τα κύτταρα από το ζωτικό οξυγόνο που απαιτείται για την αποτελεσματική επιδιόρθωση των ιστών6.
Τα ώριμα βιοφίλμ είναι ιδιαίτερα ανθεκτικά στους αντιμικροβιακούς παράγοντες, απαιτώντας επιθετικές στρατηγικές για τον έλεγχο των λοιμώξεων από βιοφίλμ, όπως μηχανική επεξεργασία ακολουθούμενη από αποτελεσματική αντιμικροβιακή θεραπεία. Επειδή τα βιοφίλμ μπορούν να αναγεννηθούν γρήγορα, τα αποτελεσματικά αντιμικροβιακά μπορούν να μειώσουν τον κίνδυνο επανασχηματισμού μετά από χειρουργικό καθαρισμό7.
Ο άργυρος χρησιμοποιείται ολοένα και περισσότερο σε αντιμικροβιακούς επιδέσμους και συχνά ως θεραπεία πρώτης γραμμής για χρόνια μολυσμένα τραύματα. Υπάρχουν πολλά εμπορικά διαθέσιμα ασημικά επιθέματα, καθένα από τα οποία περιέχει διαφορετική σύνθεση, συγκέντρωση και βασική μήτρα αργύρου. Οι πρόοδοι στα ασημένια περιβραχιόνια έχουν οδηγήσει στην ανάπτυξη νέων ασημένιων περιβραχιόνων. Η μεταλλική μορφή του αργύρου (Ag0) είναι αδρανής. Για να επιτευχθεί αντιμικροβιακή αποτελεσματικότητα, πρέπει να χάσει ένα ηλεκτρόνιο για να σχηματίσει ιοντικό άργυρο (Ag1+). Τα παραδοσιακά επιθέματα αργύρου περιέχουν ενώσεις αργύρου ή μεταλλικό άργυρο τα οποία, όταν εκτίθενται σε υγρό, αποσυντίθενται για να σχηματίσουν ιόντα Ag1+. Αυτά τα ιόντα Ag1+ αντιδρούν με το βακτηριακό κύτταρο, αφαιρώντας ηλεκτρόνια από δομικά συστατικά ή κρίσιμες διεργασίες που είναι απαραίτητες για την επιβίωση. Η κατοχυρωμένη με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας τεχνολογία έχει οδηγήσει στην ανάπτυξη μιας νέας ένωσης αργύρου, των οξυάλατων Ag (νιτρικό άργυρο, Ag7NO11), η οποία περιλαμβάνεται στους επιδέσμους τραυμάτων. Σε αντίθεση με τον παραδοσιακό άργυρο, η αποσύνθεση των αλάτων που περιέχουν οξυγόνο παράγει καταστάσεις αργύρου με υψηλότερο σθένος (Ag1+, Ag2+ και Ag3+). Μελέτες in vitro έχουν δείξει ότι οι χαμηλές συγκεντρώσεις οξυγονωμένων αλάτων αργύρου είναι πιο αποτελεσματικές από το μονοϊον αργύρου (Ag1+) έναντι παθογόνων βακτηρίων όπως Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus και Escherichia coli8,9. Ένας άλλος νέος τύπος επιδέσμου αργύρου περιλαμβάνει πρόσθετα συστατικά, δηλαδή αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA) και χλωριούχο βενζεθόνιο (BC), τα οποία αναφέρεται ότι στοχεύουν το βιοφίλμ EPS και έτσι αυξάνουν τη διείσδυση του αργύρου στο βιοφίλμ. Αυτές οι νέες τεχνολογίες αργύρου προσφέρουν νέους τρόπους στόχευσης των βιοφίλμ τραυμάτων. Ωστόσο, η επίδραση αυτών των αντιμικροβιακών στο περιβάλλον του τραύματος και στην ανεξάρτητη από μόλυνση επούλωση είναι σημαντική για να διασφαλιστεί ότι δεν δημιουργούν δυσμενές περιβάλλον τραύματος ή καθυστερούν την επούλωση. Ανησυχίες σχετικά με την κυτταροτοξικότητα του αργύρου in vitro έχουν αναφερθεί με αρκετούς επιδέσμους αργύρου10,11. Ωστόσο, η κυτταροτοξικότητα in vitro δεν έχει ακόμη μεταφραστεί σε τοξικότητα in vivo και αρκετοί επίδεσμοι Ag1+ έχουν επιδείξει ένα καλό προφίλ ασφάλειας12.
Εδώ, διερευνήσαμε την αποτελεσματικότητα των επιδέσμων καρβοξυμεθυλοκυτταρίνης που περιέχουν νέες συνθέσεις αργύρου έναντι του βιοφίλμ τραυμάτων in vitro και in vivo. Επιπλέον, αξιολογήθηκαν οι επιδράσεις αυτών των επιδέσμων στις ανοσολογικές αποκρίσεις και στην επούλωση ανεξάρτητα από τη μόλυνση.
Όλα τα επιθέματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν εμπορικά διαθέσιμα. Το 3M Kerracel Gel Fiber Dressing (3M, Knutsford, Ηνωμένο Βασίλειο) είναι ένα μη αντιμικροβιακό επίθεμα από ίνες γέλης 100% καρβοξυμεθυλοκυτταρίνης (CMC) που χρησιμοποιήθηκε ως επίδεσμος ελέγχου σε αυτή τη μελέτη. Αξιολογήθηκαν τρία αντιμικροβιακά επιθέματα αργύρου CMC, συγκεκριμένα το 3M Kerracel Ag (3M, Knutsford, Ηνωμένο Βασίλειο), το οποίο περιέχει 1,7% κ.β. οξυγονωμένο άλας αργύρου (Ag7NO11) σε ιόντα αργύρου υψηλότερου σθένους (Ag1+, Ag2+ και Ag3+). Κατά την αποσύνθεση του Ag7NO11, σχηματίζονται ιόντα Ag1+, Ag2+ και Ag3+ σε αναλογία 1:2:4. Επίθεμα Aquacel Ag Extra που περιέχει 1,2% χλωριούχο άργυρο (Ag1+) (ConvaTec, Deeside, Ηνωμένο Βασίλειο) 13 και επίθεμα Aquacel Ag + Extra που περιέχει 1,2% χλωριούχο άργυρο (Ag1+), EDTA και χλωριούχο βενζεθόνιο (ConvaTec, Deeside, Ηνωμένο Βασίλειο) 14.
Τα στελέχη που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη ήταν Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (Δημόσια Υγεία Αγγλίας, Salisbury) και Staphylococcus aureus NCTC 6571 (Δημόσια Υγεία Αγγλίας, Salisbury).
Τα βακτήρια αναπτύχθηκαν όλη τη νύχτα σε ζωμό Muller-Hinton (Oxoid, Altrincham, Ηνωμένο Βασίλειο). Η καλλιέργεια που αναπτύχθηκε όλη τη νύχτα αραιώθηκε στη συνέχεια 1:100 σε ζωμό Mueller-Hinton και 200 µl τοποθετήθηκαν σε αποστειρωμένες μεμβράνες κυκλοπόρων Whatman 0,2 µm (Whatman plc, Maidstone, Ηνωμένο Βασίλειο) σε πλάκες άγαρ Mueller-Hinton (Sigma-Aldrich Company Ltd, Κεντ, Μεγάλη Βρετανία). Σχηματισμός βιοφίλμ αποικιών στους 37°C για 24 ώρες. Αυτά τα βιοφίλμ αποικιών ελέγχθηκαν για λογαριθμική συρρίκνωση.
Κόψτε το επίθεμα σε τετράγωνα κομμάτια 3 cm2 και προ-υγραίνετε με αποστειρωμένο απιονισμένο νερό. Τοποθετήστε τον επίδεσμο πάνω από το βιοφίλμ της αποικίας στην πλάκα άγαρ. Κάθε 24 εκτάρια βιοφίλμ αφαιρέθηκαν και τα βιώσιμα βακτήρια εντός του βιοφίλμ (CFU/ml) ποσοτικοποιήθηκαν με σειριακή αραίωση (10−1 έως 10−7) σε ζωμό εξουδετέρωσης Day-Angle (Merck-Millipore). Μετά από 24 ώρες επώασης στους 37°C, πραγματοποιήθηκαν τυπικές μετρήσεις πλακών σε πλάκες άγαρ Mueller-Hinton. Κάθε επεξεργασία και χρονικό σημείο πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν και οι μετρήσεις πλακών επαναλήφθηκαν για κάθε αραίωση.
Το δέρμα της χοιρινής κοιλιάς λαμβάνεται από θηλυκά μεγάλα λευκά χοιρίδια εντός 15 λεπτών από τη σφαγή, σύμφωνα με τα πρότυπα εξαγωγών της Ευρωπαϊκής Ένωσης. Το δέρμα ξυρίστηκε και καθαρίστηκε με μαντηλάκια εμποτισμένα με οινόπνευμα και στη συνέχεια καταψύχθηκε στους -80°C για 24 ώρες για να αφυδατωθεί το δέρμα. Μετά την απόψυξη, κομμάτια δέρματος 1 cm2 πλύθηκαν τρεις φορές με PBS, 0,6% υποχλωριώδες νάτριο και 70% αιθανόλη για 20 λεπτά κάθε φορά. Πριν από την αφαίρεση της επιδερμίδας, αφαιρέστε τυχόν υπολειπόμενη αιθανόλη πλένοντας 3 φορές σε αποστειρωμένο PBS. Το δέρμα καλλιεργήθηκε σε πλάκα 6 φρεατίων με μεμβράνη νάιλον πάχους 0,45 μm (Merck-Millipore) στην κορυφή και 3 απορροφητικά επιθέματα (Merck-Millipore) που περιείχαν 3 ml εμβρυϊκό ορό βοοειδών (Sigma) συμπληρωμένο με 10% τροποποιημένο μέσο Dulbecco's Eagle. (Dulbecco's Modified Eagle Medium – Aldrich Ltd.).
Τα βιοφίλμ αποικίας αναπτύχθηκαν όπως περιγράφεται για τις μελέτες έκθεσης σε βιοφίλμ. Μετά την καλλιέργεια του βιοφίλμ στη μεμβράνη για 72 ώρες, το βιοφίλμ εφαρμόστηκε στην επιφάνεια του δέρματος χρησιμοποιώντας έναν αποστειρωμένο βρόχο εμβολιασμού και η μεμβράνη αφαιρέθηκε. Το βιοφίλμ στη συνέχεια επωάστηκε στο χόριο του χοίρου για επιπλέον 24 ώρες στους 37°C για να επιτραπεί στο βιοφίλμ να ωριμάσει και να προσκολληθεί στο δέρμα του χοίρου. Αφού το βιοφίλμ ωρίμασε και προσκολλήθηκε, ένας επίδεσμος 1,5 cm2, προ-υγραμένος με αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό, εφαρμόστηκε απευθείας στην επιφάνεια του δέρματος και επωάστηκε στους 37°C για 24 ώρες. Τα βιώσιμα βακτήρια απεικονίστηκαν με χρώση εφαρμόζοντας ομοιόμορφα αντιδραστήριο βιωσιμότητας κυττάρων PrestoBlue (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, Ηνωμένο Βασίλειο) στην κορυφαία επιφάνεια κάθε μοσχεύματος και επωάζοντάς το για 5 λεπτά. Χρησιμοποιήστε την ψηφιακή κάμερα Leica DFC425 για να καταγράψετε άμεσα εικόνες στο μικροσκόπιο Leica MZ8. Οι περιοχές με ροζ χρώμα ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Image Pro έκδοση 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (mediacy.com)). Η ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται παρακάτω.
Τα βακτήρια που αναπτύχθηκαν όλη τη νύχτα αραιώθηκαν 1:100 σε ζωμό Mueller-Hinton. 200 μl καλλιέργειας προστέθηκαν σε αποστειρωμένη μεμβράνη κυκλοπόρων Whatman 0,2 μm (Whatman, Maidstone, Ηνωμένο Βασίλειο) και τοποθετήθηκαν σε άγαρ Mueller-Hinton. Οι πλάκες βιοφίλμ επωάστηκαν στους 37°C για 72 ώρες για να επιτραπεί ο σχηματισμός ώριμου βιοφίλμ.
Μετά από 3 ημέρες ωρίμανσης του βιοφίλμ, ένας τετράγωνος επίδεσμος 3 cm2 τοποθετήθηκε απευθείας πάνω στο βιοφίλμ και επωάστηκε στους 37°C για 24 ώρες. Μετά την αφαίρεση του επιδέσμου από την επιφάνεια του βιοφίλμ, προστέθηκε 1 ml αντιδραστηρίου PrestoBlue Cell Viability (Invitrogen, Waltham, MA) στην επιφάνεια κάθε βιοφίλμ για 20 δευτερόλεπτα. Οι επιφάνειες ξηράνθηκαν πριν καταγραφούν οι αλλαγές χρώματος χρησιμοποιώντας μια ψηφιακή φωτογραφική μηχανή Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., Kingston, UK).
Προετοιμάστε καλλιέργειες όλη τη νύχτα σε άγαρ Mueller-Hinton, μεταφέρετε τις μεμονωμένες αποικίες σε 10 ml ζωμού Mueller-Hinton και επωάστε τις σε αναδευτήρα στους 37°C (100 rpm). Μετά από επώαση όλη τη νύχτα, η καλλιέργεια αραιώθηκε 1:100 σε ζωμό Mueller-Hinton και 300 µl τοποθετήθηκαν σε εναπόθεση σε κυκλική μεμβράνη κυκλοπόρων Whatman 0,2 µm (Whatman International, Maidstone, Ηνωμένο Βασίλειο) σε άγαρ Mueller-Hinton και επωάστηκαν στους 37°C εντός 72 ωρών. Το ώριμο βιοφίλμ εφαρμόστηκε στο τραύμα όπως περιγράφεται παρακάτω.
Όλες οι εργασίες με ζώα πραγματοποιήθηκαν στο Πανεπιστήμιο του Μάντσεστερ βάσει άδειας έργου που εγκρίθηκε από το Γραφείο Ευημερίας των Ζώων και Δεοντολογικής Αναθεώρησης (P8721BD27) και σύμφωνα με τις οδηγίες που δημοσιεύθηκαν από το Υπουργείο Εσωτερικών στο πλαίσιο του αναθεωρημένου ASPA του 2012. Όλοι οι συγγραφείς τήρησαν τις οδηγίες άφιξης. Ποντίκια C57BL/6j οκτώ εβδομάδων (Envigo, Oxon, Ηνωμένο Βασίλειο) χρησιμοποιήθηκαν για όλες τις μελέτες in vivo. Τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνιο (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, Ηνωμένο Βασίλειο) και οι ραχιαίες επιφάνειες τους ξυρίστηκαν και καθαρίστηκαν. Σε κάθε ποντίκι χορηγήθηκε στη συνέχεια ένα τραύμα εκτομής 2 × 6 mm χρησιμοποιώντας ένα διατρητικό μηχάνημα βιοψίας Stiefel (Schuco International, Hertfordshire, Ηνωμένο Βασίλειο). Για τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ, εφαρμόστε βιοφίλμ 72 ωρών που αναπτύχθηκε στη μεμβράνη όπως περιγράφεται παραπάνω στο δερματικό στρώμα του τραύματος χρησιμοποιώντας έναν αποστειρωμένο βρόχο εμβολιασμού αμέσως μετά τον τραυματισμό και απορρίψτε τη μεμβράνη. Ένα τετραγωνικό εκατοστό επιδέσμου προ-υγραίνεται με αποστειρωμένο νερό για να διατηρηθεί ένα υγρό περιβάλλον τραύματος. Επίδεσμοι εφαρμόστηκαν απευθείας σε κάθε τραύμα και καλύφθηκαν με μεμβράνη 3M Tegaderm (3M, Bracknell, Ηνωμένο Βασίλειο) και υγρή κόλλα Mastisol (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) εφαρμοσμένη γύρω από τις άκρες για να παρέχει πρόσθετη πρόσφυση. Χορηγήθηκε βουπρενορφίνη (Animalcare, Υόρκη, Ηνωμένο Βασίλειο) σε συγκέντρωση 0,1 mg/kg ως αναλγητικό. Τα ποντίκια θανατώθηκαν τρεις ημέρες μετά τον τραυματισμό χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του Προγράμματος 1 και αφαιρέθηκε, κόπηκε στη μέση και αποθηκεύτηκε η περιοχή του τραύματος όπως απαιτείται.
Η χρώση με αιματοξυλίνη (ThermoFisher Scientific) και ηωσίνη (ThermoFisher Scientific) πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η περιοχή του τραύματος και η επανεπιθηλιοποίηση ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Image Pro έκδοση 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD).
Οι τομές ιστού αποκηρωθήκαν σε ξυλόλιο (ThermoFisher Scientific, Loughborough, Ηνωμένο Βασίλειο), ενυδατώθηκαν με 100–50% διαβαθμισμένη αιθανόλη και βυθίστηκαν για λίγο σε απιονισμένο νερό (ThermoFisher Scientific). Η ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ VectaStain Elite ABC PK-6104 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Πρωτογενή αντισώματα έναντι ουδετερόφιλων NIMP-R14 (Thermofisher Scientific) και μακροφάγων Ms CD107b Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, Ηνωμένο Βασίλειο) αραιώθηκαν 1:100 σε διάλυμα αποκλεισμού και προστέθηκαν στην επιφάνεια κοπής, ακολουθούμενα από 2 αντισώματα Anti-, VectaStain ABC και κιτ υποστρώματος Vector Nova Red Peroxidase (HRP) (Vector Laboratories, Burlingame, CA) και αντιχρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη. Οι εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο Olympus BX43 και ψηφιακή φωτογραφική μηχανή Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, Ηνωμένο Βασίλειο).
Δείγματα δέρματος μονιμοποιήθηκαν σε διάλυμα γλουταραλδεΰδης 2,5% και φορμαλδεΰδης 4% σε διάλυμα HEPES 0,1 M (pH 7,4) για 24 ώρες στους 4°C. Τα δείγματα αφυδατώθηκαν χρησιμοποιώντας διαβαθμισμένη αιθανόλη και ξηράνθηκαν σε CO2 χρησιμοποιώντας ξηραντήρα κρίσιμου σημείου Quorum K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, Ηνωμένο Βασίλειο) και επικαλύφθηκαν με ψεκασμό με κράμα χρυσού-παλλάδιου χρησιμοποιώντας σύστημα μίνι ψεκασμού/εκκένωσης λάμψης Quorum SC7620. Τα δείγματα απεικονίστηκαν χρησιμοποιώντας ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης FEI Quanta 250 (ThermoFisher Scientific) για την απεικόνιση του κεντρικού σημείου του τραύματος.
Ιωδιούχο Toto-1 (2 μM) εφαρμόστηκε στην επιφάνεια του τραύματος του ποντικού που είχε αφαιρεθεί και επωάστηκε για 5 λεπτά στους 37 °C (ThermoFisher Scientific) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Syto-60 (10 μM) στους 37 °C (ThermoFisher Scientific). Δημιουργήθηκαν εικόνες Z-stack 15 λεπτών χρησιμοποιώντας ένα Leica TCS SP8.
Τα βιολογικά και τεχνικά δεδομένα επαναλήψεων καταγράφηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Graphpad Prism V9 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Για τον έλεγχο των διαφορών μεταξύ κάθε θεραπείας και του μη αντιμικροβιακού επιδέσμου ελέγχου χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης με πολλαπλές συγκρίσεις χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Dunnett's post hoc. Μια τιμή p <0,05 θεωρήθηκε σημαντική.
Η αποτελεσματικότητα των ινωδών επιδέσμων σε μορφή γέλης αργύρου αξιολογήθηκε αρχικά έναντι αποικιών βιοφίλμ Staphylococcus aureus και Pseudomonas aeruginosa in vitro. Οι επίδεσμοι αργύρου περιέχουν διαφορετικές φόρμουλες αργύρου: οι παραδοσιακοί επίδεσμοι αργύρου παράγουν ιόντα Ag1+. Οι επίδεσμοι αργύρου, οι οποίοι μπορούν να παράγουν ιόντα Ag1+ μετά την προσθήκη EDTA/BC, μπορούν να καταστρέψουν τη μήτρα του βιοφίλμ και να εκθέσουν τα βακτήρια σε άργυρο υπό την αντιβακτηριακή δράση των ιόντων αργύρου15 και των επιδέσμων που περιέχουν οξυγονωμένα άλατα Ag που παράγουν ιόντα Ag1+, Ag2+ και Ag3+. Η αποτελεσματικότητά τους συγκρίθηκε με έναν μη αντιμικροβιακό επίδεσμο ελέγχου κατασκευασμένο από πηκτωματώδεις ίνες. Τα εναπομείναντα βιώσιμα βακτήρια εντός του βιοφίλμ αξιολογήθηκαν κάθε 24 ώρες για 8 ημέρες (Σχήμα 1). Την 5η ημέρα, το βιοφίλμ επαναεμβολιάστηκε με 3,85 × 105S. Staphylococcus aureus ή 1,22×105P. aeruginosa για την αξιολόγηση της ανάκτησης του βιοφίλμ. Σε σύγκριση με τους μη αντιμικροβιακούς επιδέσμους ελέγχου, οι επίδεσμοι Ag1+ είχαν ελάχιστη επίδραση στη βιωσιμότητα των βακτηρίων σε βιοφίλμ Staphylococcus aureus και Pseudomonas aeruginosa σε διάστημα 5 ημερών. Αντίθετα, οι επίδεσμοι που περιείχαν οξυγονωμένο Ag και άλατα Ag1+ + EDTA/BC ήταν αποτελεσματικοί στην εξόντωση των βακτηρίων εντός του βιοφίλμ εντός 5 ημερών. Μετά από επαναλαμβανόμενο εμβολιασμό με πλαγκτονικά βακτήρια την 5η ημέρα, δεν παρατηρήθηκε αποκατάσταση του βιοφίλμ (Εικ. 1).
Ποσοτικοποίηση βιώσιμων βακτηρίων σε βιοφίλμ Staphylococcus aureus και Pseudomonas aeruginosa μετά από επεξεργασία με επιθέματα αργύρου. Οι αποικίες βιοφίλμ Staphylococcus aureus και Pseudomonas aeruginosa υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με επιθέματα αργύρου ή μη αντιμικροβιακούς επιθέματα ελέγχου και ο αριθμός των βιώσιμων βακτηρίων που παρέμεναν προσδιοριζόταν κάθε 24 ώρες. Μετά από 5 ημέρες, το βιοφίλμ επαναμολυνθηκε με 3,85×105S. Staphylococcus aureus ή 1,22×105P. Αποικίες του βακτηριοπλαγκτόν Pseudomonas aeruginosa σχηματίστηκαν ξεχωριστά για την αξιολόγηση της ανάκτησης του βιοφίλμ. Τα γραφήματα δείχνουν μέσο +/- τυπικό σφάλμα.
Για να απεικονιστεί η επίδραση των επιδέσμων αργύρου στη βιωσιμότητα του βιοφίλμ, οι επίδεσμοι εφαρμόστηκαν σε ώριμα βιοφίλμ που αναπτύχθηκαν σε δέρμα χοίρου ex vivo. Μετά από 24 ώρες, ο επίδεσμος αφαιρείται και το βιοφίλμ χρωματίζεται με μια μπλε αντιδραστική χρωστική, η οποία μεταβολίζεται από ζωντανά βακτήρια σε ροζ χρώμα. Τα βιοφίλμ που υποβλήθηκαν σε αγωγή με επιδέσμους ελέγχου ήταν ροζ, υποδεικνύοντας την παρουσία βιώσιμων βακτηρίων μέσα στο βιοφίλμ (Σχήμα 2Α). Αντίθετα, το βιοφίλμ που υποβλήθηκε σε αγωγή με τον επίδεσμο Ag oxysols ήταν κυρίως μπλε, υποδεικνύοντας ότι τα υπόλοιπα βακτήρια στην επιφάνεια του δέρματος του χοίρου ήταν μη βιώσιμα βακτήρια (Σχήμα 2Β). Μικτός μπλε και ροζ χρωματισμός παρατηρήθηκε σε βιοφίλμ που υποβλήθηκαν σε αγωγή με επιδέσμους που περιείχαν Ag1+, υποδεικνύοντας την παρουσία βιώσιμων και μη βιώσιμων βακτηρίων μέσα στο βιοφίλμ (Σχήμα 2C), ενώ οι επίδεσμοι EDTA/BC που περιείχαν Ag1+ ήταν κυρίως μπλε με μερικές ροζ κηλίδες, υποδεικνύοντας περιοχές που δεν επηρεάστηκαν από τον επίδεσμο αργύρου (Σχήμα 2D). Η ποσοτικοποίηση των ενεργών (ροζ) και ανενεργών (μπλε) περιοχών έδειξε ότι το έμπλαστρο ελέγχου ήταν 75% ενεργό (Σχήμα 2Ε). Οι επίδεσμοι Ag1+ + EDTA/BC είχαν παρόμοια απόδοση με τους οξυγονωμένους επιδέσμους άλατος Ag, με ποσοστά επιβίωσης 13% και 14% αντίστοιχα. Ο επίδεσμος Ag1+ μείωσε επίσης τη βιωσιμότητα των βακτηρίων κατά 21%. Αυτά τα βιοφίλμ παρατηρήθηκαν στη συνέχεια χρησιμοποιώντας ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης (SEM). Μετά την επεξεργασία με τον επίδεσμο ελέγχου και τον επίδεσμο Ag1+, παρατηρήθηκε ένα στρώμα Pseudomonas aeruginosa που κάλυπτε το δέρμα του χοίρου (Σχήμα 2F,H), ενώ μετά την επεξεργασία με τον επίδεσμο Ag1+, βρέθηκαν λίγα βακτηριακά κύτταρα και λίγα βακτηριακά κύτταρα από κάτω. Οι ίνες κολλαγόνου μπορούν να θεωρηθούν ως η δομή ιστού του δέρματος του χοίρου (Σχήμα 2G). Μετά την επεξεργασία με τον επίδεσμο Ag1+ + EDTA/BC, ήταν ορατές βακτηριακές πλάκες και υποκείμενες πλάκες ινών κολλαγόνου (Σχήμα 2I).
Οπτικοποίηση βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa μετά από επεξεργασία με επίδεσμο αργύρου. (A–D) Η βακτηριακή βιωσιμότητα σε βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa που αναπτύχθηκαν σε δέρμα χοίρου απεικονίστηκε χρησιμοποιώντας χρωστική βιωσιμότητας PrestoBlue 24 ώρες μετά την επεξεργασία με επιδέσμους αργύρου ή μη αντιμικροβιακούς επιδέσμους ελέγχου. Τα ζωντανά βακτήρια είναι ροζ, τα μη βιώσιμα βακτήρια και το δέρμα χοίρου είναι μπλε. (E) Ποσοτικοποίηση βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa που αναπτύχθηκαν σε δέρμα χοίρου (ροζ κηλίδα) χρησιμοποιώντας ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης Image Pro έκδοση 10 (FI) και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με επίδεσμο αργύρου ή μη αντιμικροβιακό επίδεσμο ελέγχου για 24 ώρες. Κλίμακα SEM bar = 5 µm. (J–M) Τα βιοφίλμ αποικίας αναπτύχθηκαν σε φίλτρα και χρωματίστηκαν με αντιδραστική χρωστική PrestoBlue μετά από 24 ώρες επώασης με επιδέσμους αργύρου.
Για να προσδιοριστεί εάν η στενή επαφή μεταξύ των επιδέσμων και των βιοφίλμ επηρέασε την αποτελεσματικότητα των επιδέσμων, βιοφίλμ αποικιακής προέλευσης τοποθετημένα σε επίπεδη επιφάνεια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τους επιδέσμους για 24 ώρες και στη συνέχεια χρωματίστηκαν με αντιδραστικές χρωστικές ουσίες. Το μη επεξεργασμένο βιοφίλμ είχε σκούρο ροζ χρώμα (Σχήμα 2J). Σε αντίθεση με τα βιοφίλμ που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με επιδέσμους που περιείχαν οξυγονωμένα άλατα Ag (Σχήμα 2K), τα βιοφίλμ που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με επιδέσμους που περιείχαν Ag1+ ή Ag1+ + EDTA/BC εμφάνισαν ζώνες ροζ χρώσης (Σχήμα 2L,M). Αυτός ο ροζ χρωματισμός υποδεικνύει την παρουσία βιώσιμων βακτηρίων και σχετίζεται με την περιοχή ραφής μέσα στον επίδεσμο. Αυτές οι ραμμένες περιοχές δημιουργούν νεκρούς χώρους που επιτρέπουν στα βακτήρια μέσα στο βιοφίλμ να επιβιώσουν.
Για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των επιδέσμων αργύρου in vivo, τραύματα πλήρους πάχους που είχαν αφαιρεθεί από ποντίκια μολυσμένα με ώριμα βιοφίλμ S. aureus και P. aeruginosa υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μη αντιμικροβιακούς επιδέσμους ελέγχου ή επιδέσμους αργύρου. Μετά από 3 ημέρες θεραπείας, η μακροσκοπική ανάλυση εικόνας έδειξε μικρότερα μεγέθη τραυμάτων όταν υποβλήθηκαν σε θεραπεία με οξυγονωμένους επιδέσμους αλατιού σε σύγκριση με τους μη αντιμικροβιακούς επιδέσμους ελέγχου και άλλους επιδέσμους αργύρου (Σχήμα 3Α-Η). Για την επιβεβαίωση αυτών των παρατηρήσεων, τα τραύματα συλλέχθηκαν και η περιοχή του τραύματος και η επανεπιθηλιοποίηση ποσοτικοποιήθηκαν σε τομές ιστού χρωματισμένες με αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρησιμοποιώντας το λογισμικό image pro έκδοση 10 (Σχήμα 3Ι-Λ).
Η επίδραση των επιδέσμων αργύρου στην επιφάνεια του τραύματος και η επαναεπιθηλιοποίηση τραυμάτων μολυσμένων με βιοφίλμ. (A–H) Μικρά κύτταρα μολυσμένα με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (A–D) και Staphylococcus aureus (E–H) μετά από τρεις ημέρες θεραπείας με μη αντιμικροβιακό έλεγχο, οξυγονωμένο επίδεσμο άλατος Ag, επίδεσμο Ag1+ και επίδεσμο Ag1+. Αντιπροσωπευτικές μακροσκοπικές εικόνες. Τραύματα ποντικών με επίδεσμο Ag1+ + EDTA/BC. (IL) Αντιπροσωπευτική λοίμωξη από Pseudomonas aeruginosa, ιστολογικές τομές βαμμένες με αιματοξυλίνη και ηωσίνη, που χρησιμοποιήθηκαν για την ποσοτικοποίηση της επιφάνειας του τραύματος και της επιθηλιακής αναγέννησης. Ποσοτικοποίηση της επιφάνειας του τραύματος (M, O) και του ποσοστού επαναεπιθηλιοποίησης (N, P) τραυμάτων μολυσμένων με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (M, N) και Staphylococcus aureus (O, P) (ανά ομάδα θεραπείας n = 12). Τα γραφήματα δείχνουν μέσο +/- τυπικό σφάλμα. * σημαίνει p = < 0,05 ** σημαίνει p = < 0,01. Μακροσκοπική κλίμακα = 2,5 mm, ιστολογική κλίμακα = 500 µm.
Η ποσοτικοποίηση της επιφάνειας του τραύματος σε τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (Σχήμα 3Μ) έδειξε ότι τα τραύματα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με οξυάλατα Ag είχαν μέσο μέγεθος τραύματος 2,5 mm2, ενώ ο μη αντιμικροβιακός επίδεσμος ελέγχου είχε μέσο μέγεθος τραύματος 3,1 mm2, κάτι που δεν ισχύει. έφτασε σε στατιστική σημαντικότητα (Σχήμα 3Μ). p = 0,423). Τα τραύματα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Ag1+ ή Ag1+ + EDTA/BC δεν έδειξαν μείωση στην επιφάνεια του τραύματος (3,1 mm2 και 3,6 mm2, αντίστοιχα). Η θεραπεία με οξυγονωμένο επίδεσμο άλατος Ag προήγαγε την επαναεπιθηλιοποίηση σε μεγαλύτερο βαθμό από τον μη αντιμικροβιακό επίδεσμο ελέγχου (34% και 15%, αντίστοιχα· p = 0,029) και τον Ag1+ ή Ag1+ + EDTA/BC (10% και 11%) (Σχήμα 3Ν). , αντίστοιχα).
Παρόμοιες τάσεις στην περιοχή του τραύματος και την αναγέννηση του επιθηλίου παρατηρήθηκαν σε τραύματα που είχαν μολυνθεί με βιοφίλμ S. aureus (Σχήμα 3O). Οι επίδεσμοι που περιείχαν οξυγονωμένα άλατα αργύρου μείωσαν την περιοχή του τραύματος (2,0 mm2) κατά 23% σε σύγκριση με τον μη αντιμικροβιακό επίδεσμο ελέγχου (2,6 mm2), αν και αυτή η μείωση δεν ήταν σημαντική (p = 0,304) (Σχήμα 3O). Επιπλέον, η περιοχή του τραύματος στην ομάδα θεραπείας με Ag1+ μειώθηκε ελαφρώς (2,4 mm2), ενώ το τραύμα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με επίδεσμο Ag1+ + EDTA/BC δεν μείωσε την περιοχή του τραύματος (2,9 mm2). Τα άλατα οξυγόνου του Ag προήγαγαν επίσης την επαναεπιθηλιοποίηση των τραυμάτων που είχαν μολυνθεί με βιοφίλμ S. aureus (31%) σε μεγαλύτερο βαθμό από εκείνα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μη αντιμικροβιακούς επιδέσμους ελέγχου (12%, p = 0,003) (Σχήμα 3P). Ο επίδεσμος Ag1+ (16%, p = 0,903) και ο επίδεσμος Ag+1 + EDTA/BC (14%, p = 0,965) έδειξαν επίπεδα επιθηλιακής αναγέννησης παρόμοια με την ομάδα ελέγχου.
Για την απεικόνιση της επίδρασης των επιδέσμων αργύρου στη μήτρα βιοφίλμ, πραγματοποιήθηκε χρώση με ιωδιούχο Toto 1 και Syto 60 (Εικ. 4). Το ιωδιούχο Toto 1 είναι μια αδιαπέραστη από τα κύτταρα χρωστική που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ακριβή απεικόνιση εξωκυτταρικών νουκλεϊκών οξέων, τα οποία βρίσκονται σε αφθονία στο EPS των βιοφίλμ. Το Syto 60 είναι μια διαπερατή από τα κύτταρα χρωστική που χρησιμοποιείται ως αντίχρωση16. Παρατηρήσεις του ιωδιούχου Toto 1 και Syto 60 σε τραύματα εμβολιασμένα με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (Εικόνα 4A-D) και Staphylococcus aureus (Εικόνα 4I-L) έδειξαν ότι μετά από 3 ημέρες θεραπείας με επίδεσμο, το EPS στο βιοφίλμ μειώθηκε σημαντικά. Τα επιθέματα Ag1+ χωρίς πρόσθετα συστατικά αντιβιοφίλμ μείωσαν σημαντικά το DNA χωρίς κύτταρα σε τραύματα εμβολιασμένα με Pseudomonas aeruginosa, αλλά ήταν λιγότερο αποτελεσματικά σε τραύματα εμβολιασμένα με Staphylococcus aureus.
Απεικόνιση in vivo βιοφίλμ τραύματος μετά από 3 ημέρες θεραπείας με επιδέσμους ελέγχου ή ασημένιους επιδέσμους. Ομοεστιακές εικόνες Pseudomonas aeruginosa (A–D) και Staphylococcus aureus (I–L) χρωσμένες με Toto 1 (πράσινο) για την απεικόνιση εξωκυτταρικών νουκλεϊκών οξέων, ενός συστατικού των πολυμερών εξωκυτταρικού βιοφίλμ. Για τη χρώση ενδοκυτταρικών νουκλεϊκών οξέων, χρησιμοποιήστε Syto 60 (κόκκινο). οξέα. P. Ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης τραυμάτων μολυσμένων με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (E–H) και Staphylococcus aureus (M–P) μετά από 3 ημέρες θεραπείας με επιδέσμους ελέγχου και ασημένιους επιδέσμους. Γραμμή κλίμακας SEM = 5 µm. Γραμμή κλίμακας ομοεστιακής απεικόνισης = 50 µm.
Η ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης έδειξε ότι τα ποντίκια που εμβολιάστηκαν με αποικίες βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (Σχήμα 4E-H) και Staphylococcus aureus (Σχήμα 4M-P) είχαν σημαντικά λιγότερα βακτήρια στα τραύματά τους μετά από 3 ημέρες θεραπείας με όλα τα ασημένια επιθέματα.
Για την αξιολόγηση της επίδρασης των επιδέσμων αργύρου στη φλεγμονή τραυμάτων σε ποντίκια μολυσμένα με βιοφίλμ, τμήματα τραυμάτων μολυσμένων με βιοφίλμ που υποβλήθηκαν σε αγωγή με επιδέσμους ελέγχου ή αργύρου για 3 ημέρες χρωματίστηκαν ανοσοϊστοχημικά χρησιμοποιώντας αντισώματα ειδικά για ουδετερόφιλα και μακροφάγα. Ποσοτικός προσδιορισμός ουδετερόφιλων και μακροφάγων εσωτερικά. Σχήμα 5). Όλοι οι επίδεσμοι αργύρου μείωσαν τον αριθμό των ουδετερόφιλων και των μακροφάγων σε τραύματα μολυσμένα με Pseudomonas aeruginosa σε σύγκριση με τους μη αντιμικροβιακούς επιδέσμους ελέγχου μετά από τρεις ημέρες θεραπείας. Ωστόσο, η θεραπεία με τον οξυγονωμένο επίδεσμο άλατος αργύρου είχε ως αποτέλεσμα μεγαλύτερη μείωση των ουδετερόφιλων (p = <0,0001) και των μακροφάγων (p = <0,0001) σε σύγκριση με άλλους επιδέσμους αργύρου που εξετάστηκαν (Σχήμα 5I,J). Αν και το Ag1+ + EDTA/BC είχε μεγαλύτερη επίδραση στο βιοφίλμ τραύματος, μείωσε τα επίπεδα ουδετερόφιλων και μακροφάγων σε μικρότερο βαθμό από τον επίδεσμο Ag1+. Μέτρια τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ S. aureus παρατηρήθηκαν επίσης μετά από επίδεση με οξεσόλες Ag (p = <0,0001), Ag1+ (p = 0,0008) και Ag1++ EDTA/BC (p = 0,0043) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Παρόμοιες τάσεις παρατηρούνται και για την ουδετεροπενία. Ωστόσο, μόνο ο οξυγονωμένος επίδεσμος με άλας Ag έδειξε σημαντική μείωση στον αριθμό των μακροφάγων στον ιστό κοκκιοποίησης σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου σε τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ S. aureus (p = 0,0339) (Σχήμα 5L).
Τα ουδετερόφιλα και τα μακροφάγα ποσοτικοποιήθηκαν σε τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa και Staphylococcus aureus μετά από 3 ημέρες θεραπείας με μη αντιμικροβιακό έλεγχο ή επιδέσμους αργύρου. Τα ουδετερόφιλα (AD) και τα μακροφάγα (EH) ποσοτικοποιήθηκαν σε τομές ιστού που χρωματίστηκαν με αντισώματα ειδικά για ουδετερόφιλα ή μακροφάγα. Ποσοτικοποίηση ουδετερόφιλων (I και K) και μακροφάγων (J και L) σε τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa (I και J) και Staphylococcus aureus (K & L). N = 12 ανά ομάδα. Τα γραφήματα δείχνουν μέσο +/- τυπικό σφάλμα, τιμές σημαντικότητας σε σύγκριση με μη αντιβακτηριακό έλεγχο, * σημαίνει p = < 0,05, ** σημαίνει p = < 0,01; *** σημαίνει p = < 0,001; υποδεικνύει p = <0,0001).
Στη συνέχεια, αξιολογήσαμε την επίδραση των επιδέσμων αργύρου στην επούλωση ανεξάρτητη από τη μόλυνση. Τα μη μολυσμένα τραύματα εκτομής υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μη αντιμικροβιακό επίδεσμο ελέγχου ή με επίδεσμο αργύρου για 3 ημέρες (Σχήμα 6). Μεταξύ των επιδέσμων αργύρου που εξετάστηκαν, μόνο τα τραύματα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τον επίδεσμο οξυγονωμένου άλατος εμφανίστηκαν μικρότερα σε μακροσκοπικές εικόνες από τα τραύματα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τον έλεγχο (Σχήμα 6Α-Δ). Η ποσοτικοποίηση της επιφάνειας του τραύματος χρησιμοποιώντας ιστολογική ανάλυση έδειξε ότι η μέση επιφάνεια του τραύματος μετά την θεραπεία με τον επίδεσμο Ag oxysols ήταν 2,35 mm2 σε σύγκριση με 2,96 mm2 για τα τραύματα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με την ομάδα ελέγχου, αλλά αυτή η διαφορά δεν έφτασε σε στατιστική σημασία (p = 0,488) (Σχήμα 6Ι). Αντίθετα, δεν παρατηρήθηκε μείωση στην επιφάνεια του τραύματος μετά την θεραπεία με επιδέσμους Ag1+ (3,38 mm2, p = 0,757) ή Ag1+ + EDTA/BC (4,18 mm2, p = 0,054) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Αυξημένη επιθηλιακή αναγέννηση παρατηρήθηκε με τον επίδεσμο Ag oxysol σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (30% έναντι 22%, αντίστοιχα), αν και αυτό δεν έφτασε σε σημαντικό βαθμό (p = 0,067), κάτι που είναι αρκετά σημαντικό και επιβεβαιώνει προηγούμενα αποτελέσματα. Ένας επίδεσμος με oxysols προάγει την επαναεπιθηλιοποίηση. -Επιθηλιοποίηση μη μολυσμένων τραυμάτων17. Αντίθετα, η θεραπεία με επιδέσμους Ag1+ ή Ag1+ + EDTA/BC δεν είχε καμία επίδραση ή έδειξε μειωμένη επαναεπιθηλιοποίηση σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου.
Επίδραση του επιδέσμου με άργυρο στην επούλωση τραυμάτων σε μη μολυσμένα ποντίκια με πλήρη εκτομή. (AD) Αντιπροσωπευτικές μακροσκοπικές εικόνες τραυμάτων μετά από τρεις ημέρες θεραπείας με μη αντιμικροβιακό επίδεσμο ελέγχου και επίδεσμο με άργυρο. (EH) Αντιπροσωπευτικές τομές τραυμάτων χρωματισμένες με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Η ποσοτικοποίηση της επιφάνειας του τραύματος (I) και το ποσοστό επανεπιθηλιοποίησης (J) υπολογίστηκαν από ιστολογικές τομές στο μέσο του τραύματος χρησιμοποιώντας λογισμικό ανάλυσης εικόνας (n = 11–12 ανά ομάδα θεραπείας). Τα γραφήματα δείχνουν μέσο +/- τυπικό σφάλμα. * μέσο p = <0,05.
Ο άργυρος έχει μακρά ιστορία χρήσης ως αντιμικροβιακή θεραπεία στην επούλωση τραυμάτων, αλλά οι πολλές διαφορετικές συνθέσεις και μέθοδοι χορήγησης μπορεί να οδηγήσουν σε διαφορές στην αντιμικροβιακή αποτελεσματικότητα 18. Επιπλέον, οι ιδιότητες του αντιβιοφίλμ συγκεκριμένων συστημάτων χορήγησης αργύρου δεν είναι πλήρως κατανοητές. Αν και η ανοσολογική απόκριση του ξενιστή είναι σχετικά αποτελεσματική έναντι των πλαγκτονικών βακτηρίων, είναι γενικά λιγότερο αποτελεσματική έναντι των βιοφίλμ 19. Τα πλαγκτονικά βακτήρια φαγοκυττάρωνονται εύκολα από τα μακροφάγα, αλλά μέσα στα βιοφίλμ, τα συσσωματωμένα κύτταρα δημιουργούν πρόσθετα προβλήματα περιορίζοντας την απόκριση του ξενιστή στο βαθμό που τα ανοσοκύτταρα μπορούν να υποστούν απόπτωση και να απελευθερώσουν προφλεγμονώδεις παράγοντες για να ενισχύσουν την ανοσολογική απόκριση 20. Έχει παρατηρηθεί ότι ορισμένα λευκοκύτταρα μπορούν να διεισδύσουν στα βιοφίλμ 21 αλλά δεν είναι σε θέση να φαγοκυττάρουν βακτήρια μόλις αυτή η άμυνα διαταραχθεί 22. Θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί μια ολιστική προσέγγιση για την υποστήριξη της ανοσολογικής απόκρισης του ξενιστή έναντι της μόλυνσης του βιοφίλμ του τραύματος. Ο καθαρισμός τραυμάτων μπορεί να διαταράξει φυσικά το βιοφίλμ και να αφαιρέσει το μεγαλύτερο μέρος του βιοφορτίου, αλλά η ανοσολογική απόκριση του ξενιστή μπορεί να είναι αναποτελεσματική έναντι του υπολειπόμενου βιοφίλμ, ειδικά εάν η ανοσολογική απόκριση του ξενιστή είναι διαταραγμένη. Έτσι, οι αντιμικροβιακές θεραπείες, όπως οι επίδεσμοι με άργυρο, μπορούν να υποστηρίξουν την ανοσολογική απόκριση του ξενιστή και να εξαλείψουν τις λοιμώξεις από βιοφίλμ. Η σύνθεση, η συγκέντρωση, η διαλυτότητα και το υπόστρωμα χορήγησης μπορούν να επηρεάσουν την αντιμικροβιακή αποτελεσματικότητα του αργύρου. Τα τελευταία χρόνια, οι εξελίξεις στην τεχνολογία επεξεργασίας αργύρου έχουν καταστήσει αυτούς τους επιδέσμους πιο αποτελεσματικούς9,23. Καθώς η τεχνολογία επιδέσμων με άργυρο εξελίσσεται, είναι σημαντικό να κατανοήσουμε την αποτελεσματικότητα αυτών των επιδέσμων στον έλεγχο της λοίμωξης του τραύματος και, το πιο σημαντικό, την επίδραση αυτών των ισχυρών μορφών αργύρου στο περιβάλλον του τραύματος και στην επούλωση.
Σε αυτήν τη μελέτη, συγκρίναμε την αποτελεσματικότητα δύο προηγμένων επιδέσμων αργύρου με συμβατικούς επιδέσμους αργύρου που παράγουν ιόντα Ag1+ έναντι βιοφίλμ χρησιμοποιώντας διαφορετικά μοντέλα in vitro και in vivo. Αξιολογήσαμε επίσης την επίδραση αυτών των επιδέσμων στο περιβάλλον του τραύματος και στην επούλωση που δεν εξαρτάται από τη μόλυνση. Για να ελαχιστοποιηθεί η επίδραση του πλέγματος χορήγησης, όλοι οι επιδέσμοι αργύρου που δοκιμάστηκαν αποτελούνταν από καρβοξυμεθυλοκυτταρίνη.
Η προκαταρκτική μας αξιολόγηση αυτών των επιθεμάτων αργύρου έναντι αποικιακών βιοφίλμ Pseudomonas aeruginosa και Staphylococcus aureus δείχνει ότι, σε αντίθεση με τα παραδοσιακά επιθέματα Ag1+, δύο προηγμένα επιθέματα αργύρου, Ag1+ + EDTA/BC και οξυγονωμένα άλατα Ag, είναι αποτελεσματικά στα 5. Σκοτώνουν αποτελεσματικά τα βακτήρια του βιοφίλμ μέσα σε λίγες ημέρες. Επιπλέον, αυτά τα επιθέματα εμποδίζουν τον επανασχηματισμό βιοφίλμ μετά από επαναλαμβανόμενη έκθεση σε πλαγκτονικά βακτήρια. Το επίθεμα Ag1+ περιείχε χλωριούχο άργυρο, την ίδια ένωση αργύρου και βασική μήτρα όπως το Ag1+ + EDTA/BC, και είχε περιορισμένη επίδραση στη βακτηριακή βιωσιμότητα εντός του βιοφίλμ κατά την ίδια περίοδο. Η παρατήρηση ότι ένα επίθεμα Ag1+ + EDTA/BC ήταν πιο αποτελεσματικό έναντι του βιοφίλμ από ένα επίθεμα Ag1+ που αποτελείται από την ίδια μήτρα και μια ένωση αργύρου υποστηρίζει την άποψη ότι απαιτούνται πρόσθετα συστατικά για την αύξηση της αποτελεσματικότητας του χλωριούχου αργύρου έναντι του βιοφίλμ, όπως έχει αναφερθεί αλλού15. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την ιδέα ότι το BC και το EDTA παίζουν έναν επιπλέον ρόλο συμβάλλοντας στη συνολική αποτελεσματικότητα του επιδέσμου και ότι η απουσία αυτού του συστατικού στους επιδέσμους Ag1+ μπορεί να συνέβαλε στην αποτυχία επίδειξης της αποτελεσματικότητας in vitro. Διαπιστώσαμε ότι οι οξυγονωμένοι επίδεσμοι άλατος Ag που παράγουν ιόντα Ag2+ και Ag3+ εμφάνισαν ισχυρότερη αντιβακτηριακή αποτελεσματικότητα από τον Ag1+ και σε επίπεδα παρόμοια με το Ag1+ + EDTA/BC. Ωστόσο, λόγω του υψηλού οξειδοαναγωγικού δυναμικού, δεν είναι σαφές για πόσο καιρό τα ιόντα Ag3+ παραμένουν ενεργά και αποτελεσματικά έναντι των βιοφίλμ τραυμάτων και ως εκ τούτου χρήζουν περαιτέρω μελέτης. Επιπλέον, υπάρχουν πολλοί διαφορετικοί επίδεσμοι που παράγουν ιόντα Ag1+ που δεν δοκιμάστηκαν σε αυτή τη μελέτη. Αυτοί οι επίδεσμοι αποτελούνται από διαφορετικές ενώσεις αργύρου, συγκεντρώσεις και βασικές μήτρες, οι οποίες μπορεί να επηρεάσουν την παροχή ιόντων Ag1+ και την αποτελεσματικότητά τους έναντι των βιοφίλμ. Αξίζει επίσης να σημειωθεί ότι υπάρχουν πολλά διαφορετικά μοντέλα in vitro και in vivo που χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των επιδέσμων τραυμάτων έναντι των βιοφίλμ. Ο τύπος του μοντέλου που χρησιμοποιείται, καθώς και η περιεκτικότητα σε αλάτι και πρωτεΐνη των μέσων που χρησιμοποιούνται σε αυτά τα μοντέλα, θα επηρεάσουν την αποτελεσματικότητα του επιδέσμου. Στο μοντέλο μας in vivo, αφήσαμε το βιοφίλμ να ωριμάσει in vitro και στη συνέχεια το μεταφέραμε στην δερματική επιφάνεια του τραύματος. Η ανοσολογική απόκριση του ποντικού ξενιστή είναι σχετικά αποτελεσματική έναντι των πλαγκτονικών βακτηρίων που εφαρμόζονται στο τραύμα, σχηματίζοντας έτσι ένα βιοφίλμ καθώς το τραύμα επουλώνεται. Η προσθήκη ώριμου βιοφίλμ σε ένα τραύμα περιορίζει την αποτελεσματικότητα της ανοσολογικής απόκρισης του ξενιστή στον σχηματισμό βιοφίλμ, επιτρέποντας στο ώριμο βιοφίλμ να εγκατασταθεί μέσα στο τραύμα πριν ξεκινήσει η επούλωση. Έτσι, το μοντέλο μας μας επιτρέπει να αξιολογήσουμε την αποτελεσματικότητα των αντιμικροβιακών επιδέσμων σε ώριμα βιοφίλμ πριν αρχίσουν να επουλώνονται τα τραύματα.
Διαπιστώσαμε επίσης ότι η εφαρμογή του επιδέσμου επηρέασε την αποτελεσματικότητα των επιδέσμων αργύρου σε βιοφίλμ που αναπτύχθηκαν in vitro και σε δέρμα χοίρου. Η στενή επαφή με το τραύμα θεωρείται κρίσιμη για την αντιμικροβιακή αποτελεσματικότητα του επιδέσμου24,25. Οι επίδεσμοι που περιείχαν οξυγονωμένα άλατα αργύρου βρίσκονταν σε στενή επαφή με ώριμα βιοφίλμ, με αποτέλεσμα τη σημαντική μείωση του αριθμού των βιώσιμων βακτηρίων μέσα στο βιοφίλμ μετά από 24 ώρες. Αντίθετα, όταν υποβλήθηκαν σε αγωγή με επιδέσμους Ag1+ και Ag1+ + EDTA/BC, παρέμεινε σημαντικός αριθμός βιώσιμων βακτηρίων. Αυτοί οι επίδεσμοι περιέχουν ράμματα σε όλο το μήκος του επιδέσμου, γεγονός που δημιουργεί νεκρούς χώρους που εμποδίζουν τη στενή επαφή με το βιοφίλμ. Στις μελέτες μας in vitro, αυτές οι περιοχές χωρίς επαφή εμπόδισαν τη θανάτωση βιώσιμων βακτηρίων μέσα στο βιοφίλμ. Αξιολογήσαμε τη βακτηριακή βιωσιμότητα μόνο μετά από 24 ώρες θεραπείας. Με την πάροδο του χρόνου, καθώς ο επίδεσμος γίνεται πιο κορεσμένος, μπορεί να υπάρχει λιγότερος νεκρός χώρος, μειώνοντας την περιοχή για αυτά τα βιώσιμα βακτήρια. Ωστόσο, αυτό υπογραμμίζει τη σημασία της σύνθεσης του επιδέσμου, όχι μόνο του τύπου του αργύρου στον επίδεσμο.
Ενώ οι μελέτες in vitro είναι χρήσιμες για τη σύγκριση της αποτελεσματικότητας διαφορετικών τεχνολογιών αργύρου, είναι επίσης σημαντικό να κατανοήσουμε τις επιδράσεις αυτών των επιδέσμων στα βιοφίλμ in vivo, όπου ο ιστός του ξενιστή και οι ανοσολογικές αποκρίσεις συμβάλλουν στην αποτελεσματικότητα των επιδέσμων έναντι των βιοφίλμ. Η επίδραση αυτών των επιδέσμων στα βιοφίλμ τραυμάτων παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης και χρώση EPS του βιοφίλμ χρησιμοποιώντας ενδοκυτταρικές και εξωκυτταρικές χρωστικές DNA. Διαπιστώσαμε ότι μετά από 3 ημέρες θεραπείας, όλοι οι επίδεσμοι ήταν αποτελεσματικοί στη μείωση του DNA χωρίς κύτταρα σε τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ, αλλά ο επίδεσμος Ag1+ ήταν λιγότερο αποτελεσματικός σε τραύματα μολυσμένα με Staphylococcus aureus. Η ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης έδειξε επίσης ότι υπήρχαν σημαντικά λιγότερα βακτήρια σε τραύματα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τους επιδέσμους αργύρου, αν και αυτό ήταν πιο έντονο με τον οξυγονωμένο επίδεσμο άλατος Ag και τον επίδεσμο Ag1+ + EDTA/BC σε σύγκριση με τον επίδεσμο Ag1+. Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι οι επίδεσμοι αργύρου που δοκιμάστηκαν είχαν ποικίλους βαθμούς επίδρασης στη δομή του βιοφίλμ, αλλά κανένας από τους επιδέσμους αργύρου δεν ήταν σε θέση να εξαλείψει το βιοφίλμ, υποστηρίζοντας την ανάγκη για μια ολιστική προσέγγιση στη θεραπεία των λοιμώξεων του βιοφίλμ τραυμάτων· χρήση ασημένιων περιβραχιόνων. Η θεραπεία προηγείται από φυσικό καθαρισμό για την αφαίρεση του μεγαλύτερου μέρους του βιοϋμενίου.
Τα χρόνια τραύματα βρίσκονται συχνά σε κατάσταση σοβαρής φλεγμονής, με την περίσσεια φλεγμονωδών κυττάρων να παραμένει στον ιστό του τραύματος για παρατεταμένο χρονικό διάστημα, προκαλώντας βλάβη στους ιστούς και εξαντλώντας το οξυγόνο που απαιτείται για τον αποτελεσματικό κυτταρικό μεταβολισμό και τη λειτουργία του τραύματος26. Τα βιοφίλμ επιδεινώνουν αυτό το εχθρικό περιβάλλον του τραύματος επηρεάζοντας αρνητικά την επούλωση με ποικίλους τρόπους, συμπεριλαμβανομένης της αναστολής του πολλαπλασιασμού και της μετανάστευσης των κυττάρων και της ενεργοποίησης προφλεγμονωδών κυτοκινών27. Καθώς οι επίδεσμοι αργύρου γίνονται πιο αποτελεσματικοί, είναι σημαντικό να κατανοήσουμε τον αντίκτυπο που έχουν στο περιβάλλον και την επούλωση του τραύματος.
Είναι ενδιαφέρον ότι, παρόλο που όλα τα επιθέματα αργύρου επηρέασαν τη σύνθεση του βιοφίλμ, μόνο τα οξυγονωμένα επιθέματα με άλατα αργύρου αύξησαν την επαναεπιθηλιοποίηση αυτών των μολυσμένων τραυμάτων. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν τα προηγούμενα ευρήματά μας17 και αυτά των Kalan et al. (2017)28, τα οποία κατέδειξαν καλά προφίλ ασφάλειας και τοξικότητας των οξυγονωμένων αλάτων αργύρου, καθώς χαμηλότερες συγκεντρώσεις αργύρου ήταν αποτελεσματικές έναντι των βιοφίλμ.
Η τρέχουσα μελέτη μας υπογραμμίζει τις διαφορές στην τεχνολογία αργύρου μεταξύ των αντιμικροβιακών επιδέσμων αργύρου και την επίδραση αυτής της τεχνολογίας στο περιβάλλον του τραύματος και στην ανεξάρτητη από τη μόλυνση επούλωση. Ωστόσο, αυτά τα αποτελέσματα διαφέρουν από προηγούμενες μελέτες που δείχνουν ότι ο επίδεσμος Ag1+ + EDTA/BC βελτίωσε τις παραμέτρους επούλωσης τραυματισμένων αυτιών κουνελιού in vivo. Ωστόσο, αυτό μπορεί να οφείλεται σε διαφορές στα ζωικά μοντέλα, τους χρόνους μέτρησης και τις μεθόδους βακτηριακής εφαρμογής29. Σε αυτήν την περίπτωση, οι μετρήσεις του τραύματος ελήφθησαν 12 ημέρες μετά τον τραυματισμό, ώστε να επιτραπεί στα ενεργά συστατικά του επιδέσμου να δράσουν στο βιοφίλμ για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. Αυτό υποστηρίζεται από μια μελέτη που έδειξε ότι τα κλινικά μολυσμένα έλκη ποδιών που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Ag1+ + EDTA/BC αρχικά αυξήθηκαν σε μέγεθος μετά από μία εβδομάδα θεραπείας και στη συνέχεια κατά τις επόμενες 3 εβδομάδες θεραπείας με Ag1+ + EDTA/BC και εντός 4 εβδομάδων από τη χρήση μη αντιμικροβιακών φαρμάκων. Επιδέσμοι CMC για τη μείωση του μεγέθους των ελκών30.
Ορισμένες μορφές και συγκεντρώσεις αργύρου έχουν αποδειχθεί προηγουμένως κυτταροτοξικές in vitro 11, αλλά αυτά τα αποτελέσματα in vitro δεν μεταφράζονται πάντα σε ανεπιθύμητες ενέργειες in vivo. Επιπλέον, οι εξελίξεις στην τεχνολογία του αργύρου και η καλύτερη κατανόηση των ενώσεων και των συγκεντρώσεων αργύρου στους επιδέσμους έχουν οδηγήσει στην ανάπτυξη πολλών ασφαλών και αποτελεσματικών επιδέσμων αργύρου. Ωστόσο, καθώς η τεχνολογία επιδέσμων αργύρου εξελίσσεται, είναι σημαντικό να κατανοήσουμε την επίδραση αυτών των επιδέσμων στο περιβάλλον του τραύματος31,32,33. Έχει αναφερθεί προηγουμένως ότι ο αυξημένος ρυθμός επαναεπιθηλιοποίησης αντιστοιχεί σε αυξημένη αναλογία αντιφλεγμονωδών μακροφάγων M2 σε σύγκριση με τον προφλεγμονώδη φαινότυπο M1. Αυτό παρατηρήθηκε σε ένα προηγούμενο μοντέλο ποντικού όπου οι επίδεσμοι τραυμάτων υδρογέλης αργύρου συγκρίθηκαν με σουλφαδιαζίνη αργύρου και μη αντιμικροβιακές υδρογέλες34.
Τα χρόνια τραύματα μπορεί να εμφανίζουν υπερβολική φλεγμονή και έχει παρατηρηθεί ότι η παρουσία περίσσειας ουδετερόφιλων μπορεί να είναι επιζήμια για την επούλωση τραυμάτων35. Σε μια μελέτη σε ποντίκια με μειωμένα ουδετερόφιλα, η παρουσία ουδετερόφιλων καθυστέρησε την επαναεπιθηλιοποίηση. Η παρουσία περίσσειας ουδετερόφιλων οδηγεί σε υψηλά επίπεδα πρωτεασών και δραστικών ειδών οξυγόνου, όπως το υπεροξείδιο και το υπεροξείδιο του υδρογόνου, τα οποία σχετίζονται με χρόνια και αργής επούλωσης τραύματα37,38. Ομοίως, η αύξηση του αριθμού των μακροφάγων, εάν δεν ελεγχθεί, μπορεί να οδηγήσει σε καθυστερημένη επούλωση τραυμάτων39. Αυτή η αύξηση είναι ιδιαίτερα σημαντική εάν τα μακροφάγα δεν μπορούν να μεταβούν από έναν προφλεγμονώδη φαινότυπο σε έναν προ-επούλωσης φαινότυπο, με αποτέλεσμα τα τραύματα να μην μπορούν να εξέλθουν από τη φλεγμονώδη φάση της επούλωσης40. Παρατηρήσαμε μείωση στα ουδετερόφιλα και τα μακροφάγα σε τραύματα μολυσμένα με βιοφίλμ μετά από 3 ημέρες θεραπείας με όλους τους επιδέσμους αργύρου, αλλά η μείωση ήταν πιο έντονη με τους οξυγονωμένους επιδέσμους αλατιού. Αυτή η μείωση μπορεί να είναι άμεσο αποτέλεσμα της ανοσολογικής απόκρισης στον άργυρο, μιας απόκρισης σε μειωμένο βιολογικό φορτίο ή του τραύματος που βρίσκεται σε μεταγενέστερο στάδιο επούλωσης και επομένως των ανοσοκυττάρων στο τραύμα που μειώνονται. Η μείωση του αριθμού των φλεγμονωδών κυττάρων στο τραύμα μπορεί να διατηρήσει ένα περιβάλλον που ευνοεί την επούλωση του τραύματος. Ο μηχανισμός δράσης του τρόπου με τον οποίο τα οξυάλατα του αργύρου προάγουν την επούλωση ανεξάρτητη από τη μόλυνση είναι ασαφής, αλλά η ικανότητα των οξυαλάτων του αργύρου να παράγουν οξυγόνο και να καταστρέφουν τα επιβλαβή επίπεδα υπεροξειδίου του υδρογόνου, ενός μεσολαβητή της φλεγμονής, μπορεί να το εξηγήσει αυτό και απαιτεί περαιτέρω μελέτη17.
Τα χρόνια, μη επουλούμενα μολυσμένα τραύματα αποτελούν πρόβλημα τόσο για τους γιατρούς όσο και για τους ασθενείς. Παρόλο που πολλά επιθέματα ισχυρίζονται αντιμικροβιακή αποτελεσματικότητα, η έρευνα σπάνια εστιάζει σε άλλους βασικούς παράγοντες που επηρεάζουν το μικροπεριβάλλον του τραύματος. Αυτή η μελέτη δείχνει ότι διαφορετικές τεχνολογίες αργύρου έχουν διαφορετική αντιμικροβιακή αποτελεσματικότητα και, το σημαντικότερο, διαφορετικές επιδράσεις στο περιβάλλον και την επούλωση του τραύματος, ανεξάρτητα από τη μόλυνση. Παρόλο που αυτές οι μελέτες in vitro και in vivo δείχνουν την αποτελεσματικότητα αυτών των επιθεμάτων στη θεραπεία λοιμώξεων τραυμάτων και στην προώθηση της επούλωσης, απαιτούνται τυχαιοποιημένες ελεγχόμενες δοκιμές για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας αυτών των επιθεμάτων στην κλινική πράξη.
Τα σύνολα δεδομένων που χρησιμοποιήθηκαν ή/και αναλύθηκαν κατά τη διάρκεια της τρέχουσας μελέτης είναι διαθέσιμα από τον αντίστοιχο συγγραφέα κατόπιν εύλογου αιτήματος.
Ώρα δημοσίευσης: 15 Ιουλίου 2024